BCA 蛋白浓度测定

实验目的

用 BCA 比色法测定蛋白样品浓度，为后续电泳、免疫印迹等实验提供准确的蛋白上样量。

实验原理

在碱性条件下蛋白将 Cu²⁺ 还原为 Cu⁺，Cu⁺ 与 BCA 试剂螯合形成紫色复合物，其在 562 nm 处的吸光度与蛋白浓度成正比，通过与标准曲线比对定量。

实验步骤

1. 1配制标准品

   用 BSA 标准品配制梯度浓度标准溶液。

2. 2配制工作液

   按 50:1 混合 BCA 试剂 A 与 B。

3. 3加样

   将标准品与待测样品加入 96 孔板，每孔加工作液。

4. 4孵育

   37℃ 孵育 30 min（或 60℃ 15 min）。

5. 5测定

   酶标仪测定 562 nm 吸光度。

6. 6计算

   绘制标准曲线，计算待测样品浓度。

所需试剂

• BCA 试剂 A
• BCA 试剂 B
• BSA 标准品
• PBS 缓冲液
• 待测蛋白样品

所需仪器

• 酶标仪
• 96 孔板
• 微量移液器
• 恒温培养箱

安全提示

• ⚠ BCA 试剂含铜，避免接触皮肤，操作戴手套。
• ⚠ 孵育时间与温度需一致，保证标准曲线准确。
• ⚠ 样品如含还原剂会干扰测定，需先去除干扰或换方法。

预期结果

标准曲线线性良好（R²>0.99），样品吸光度落在标准曲线范围内，得到准确蛋白浓度。

关联实验

• Western Blot（蛋白质免疫印迹）
• SDS-PAGE 蛋白电泳