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细胞中等

MTT / CCK-8 细胞活力检测

预计耗时：约 4–6 小时（MTT）或 2–3 小时（CCK-8）

📌 学习状态

前置知识 / 技能

实验目的

用比色法检测细胞增殖与活力，用于药物毒性、细胞增殖等实验的定量分析。

实验原理

活细胞线粒体内的脱氢酶可将 MTT（四唑盐）还原为不溶性紫色结晶甲瓒，或用 CCK-8 生成水溶性橙黄色甲瓒；产物吸光度与活细胞数成正比，通过酶标仪检测定量。

实验步骤

  1. 1铺板

    将细胞按一定密度接种于 96 孔板，培养至贴壁。

  2. 2加药处理

    按实验设计加入药物或处理因素，设对照组与空白孔。

  3. 3培养

    37℃ 培养至设定时间点。

  4. 4加试剂

    加入 MTT 或 CCK-8 试剂。

  5. 5孵育

    继续培养（MTT 4 h / CCK-8 1–4 h）。

  6. 6测定

    酶标仪测吸光度（MTT 570 nm，需先溶解甲瓒；CCK-8 450 nm）。

  7. 7计算

    计算细胞活力百分比，绘制剂量/时间曲线。

所需试剂

  • 细胞（对数生长期）
  • 培养基
  • MTT 或 CCK-8 试剂
  • DMSO（溶解 MTT 甲瓒）
  • PBS 缓冲液

所需仪器

  • 96 孔板
  • 酶标仪
  • CO₂ 培养箱
  • 微量移液器

安全提示

  • ⚠ MTT 有毒性，戴手套操作。
  • ⚠ DMSO 溶解甲瓒时注意防护。
  • ⚠ 设空白孔与对照孔，扣除本底。

预期结果

对照组细胞活力高，处理组呈剂量/时间依赖变化，重复孔 CV 小，曲线符合预期。

结果分析

✅ 正常结果

对照组吸光度高且稳定，处理组呈剂量依赖变化，重复孔 CV 小，曲线趋势符合预期。

解读：说明实验体系稳定、加样准确，药物对细胞活力的影响可被准确定量。

⚠️ 异常结果

  • 1吸光度整体偏低

    原因：铺板细胞数不足、培养时间不够、试剂失效。

  • 2背景值高

    原因：空白孔未设或污染、试剂与培养基发生反应。

  • 3重复孔差异大

    原因：加样不均、细胞分布不均、操作误差。

  • 4结果无趋势

    原因：药物浓度设置不合理、处理时间不当。

关联实验

实验前检查清单

勾选已准备好的项目，进度保存在本机浏览器，刷新页面不丢失。

🧪 试剂

📦 耗材

🔬 仪器

🛡 安全提示

常见问题排查（Troubleshooting）

1吸光度整体偏低

可能原因

  • 铺板细胞数不足
  • 培养时间不够
  • 试剂失效

解决办法

  • 提高铺板密度
  • 延长培养时间
  • 更换新试剂
2背景值高

可能原因

  • 空白孔未设或污染
  • 试剂与培养基反应

解决办法

  • 设置空白孔
  • 核对试剂与培养基兼容性
3重复孔差异大

可能原因

  • 加样不均
  • 细胞分布不均
  • 操作误差

解决办法

  • 充分混匀细胞悬液
  • 统一加样手法
  • 增加重复孔