细胞脂质体转染

实验目的

用脂质体包裹质粒 DNA 导入真核细胞，使外源基因（如 Cas9/sgRNA）在细胞内表达，是分子到细胞的关键桥梁。

实验原理

阳离子脂质体与带负电的质粒 DNA 形成脂质体-DNA 复合物，通过内吞作用进入细胞；脂质体保护 DNA 免于降解，复合物在胞内释放质粒，外源基因得以转录表达。

实验步骤

1. 1铺板

   转染前一天将细胞接种于培养板，使转染时汇合度约 70–80%。

2. 2配制复合物

   分别用无血清培养基稀释质粒 DNA 与脂质体试剂，混合后室温孵育形成复合物。

3. 3转染

   将复合物滴加到细胞，37℃ 培养。

4. 4换液

   4–6 h 后换含血清完全培养基。

5. 5表达检测

   24–48 h 后检测转染效率（荧光或蛋白表达）。

所需试剂

• 质粒 DNA（如 CRISPR/Cas9 载体）
• 脂质体转染试剂（如 Lipofectamine）
• 无血清培养基
• 完全培养基
• 待转染细胞

所需仪器

• 超净工作台
• CO₂ 培养箱
• 倒置荧光显微镜
• 微量移液器

安全提示

• ⚠ 脂质体试剂有刺激性，戴手套操作。
• ⚠ 无血清条件下配制复合物，避免血清干扰。
• ⚠ 质粒 DNA 需无菌、高纯度、去内毒素。

预期结果

转染效率达 60–90%（荧光或蛋白表达检测），细胞形态正常、无明显毒性。

关联实验

• CRISPR/Cas9 sgRNA 设计与载体构建
• 细胞传代培养
• 单克隆细胞株筛选与扩大培养